Design PCR primers-------------PCR引物设计实践教程
1. 选择需要设计引物的基因——例如EPO
2. 进入NCBI美国国立生物技术信息中心网站National Center for Biotechnology Information
选择基因搜索条目，输入需要查找的基因 ，然后点击search搜索。
3.每个基因具体有多种物种的——例如EPO有(human)、(house mouse)、 (Norway rat)等等。选择其中需要的点击进入 。
4.找到条目NCBI Reference Sequences (RefSeq) → mRNA and Protein(s) → 点击1后面的NM_000799.2进入 。
5.进入后找到FEATURES下的CDS 蛋白质翻译区 ，找到CDS后的参数。如图为182到763
6.在末尾的ORIGIN基因序列中找出CDS部分的碱基排列 。如图为蛋白质翻译区182到763的碱基排列 。
7.打开PCR引物设计网站Primer3 Input (version 0.4.0)
将刚才找到了蛋白质翻译区的碱基序列复制到下图的框内。
8.将Product Size Ranges PCR产物长度一般控制在100-250，Primer GC%控制在40到60之间 ，最佳为50 。如图 。最后点击pick primers开始电脑设计引物。
9.得到结果 。
LEFT PRIMER 上游引物序列为tcatctgtgacagccgagtc
RIGHT PRIMER下游引物序列为tttggtgtctgggacagtga
SEQUENCE SIZE: 582 PCR产物长度为582 。
